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產(chǎn)品分類 / PRODUCT
處理:取所需樣品體積,如有必要,進(jìn)行適當(dāng)稀釋以符合測試范圍。
存儲:將樣品分裝在避光小管中,存放于-20°C以下以避免降解。避免反復(fù)凍融,建議分裝成單次使用量。
加樣:在微孔板中加入50 µL樣品到每個測試孔中。使用多通道移液器可以提高效率和準(zhǔn)確性。
孵育:將孔板覆蓋,放置在37°C孵育器中孵育1小時,或根據(jù)抗體配套文件推薦的時間進(jìn)行孵育。
洗滌次數(shù):用自動洗板機(jī)或手動洗板,每次加入300 µL洗滌緩沖液,靜置幾秒后棄液,重復(fù)此過程至少3次。
洗滌技巧:確保每次洗滌液充分覆蓋孔底,避免泡沫產(chǎn)生,因泡沫可能導(dǎo)致孔間污染。
底物加入:向每個孔中加入100 µL酶底物(如TMB),在避光條件下室溫孵育15-30分鐘。
終止反應(yīng):加入50 µL的終止液(如2N硫酸),反應(yīng)立即停止,并將顏色由藍(lán)變黃。
使用酶標(biāo)儀:在450 nm波長下讀取吸光度值。如果可能,讀取650 nm作為參考波長,以校正板材不均或泡沫的影響。
四、注意事項(xiàng)與經(jīng)驗(yàn)分享
孔板交叉污染:使用新的吸頭和適當(dāng)?shù)募夹g(shù),如慢速釋放液體到孔壁,避免液體直接沖擊到孔底。
底物不穩(wěn)定:底物開封后應(yīng)避光保存,并在推薦的有效期內(nèi)使用,過期底物可能導(dǎo)致信號弱或背景高。
提高靈敏度:優(yōu)化底物的孵育時間,觀察顏色變化,避免過度孵育導(dǎo)致信號飽和。
減少非特異性背景:增加阻斷步驟的時間或使用高效的阻斷劑,如脫脂牛奶粉或BSA,以填補(bǔ)未被抗體或抗原占據(jù)的微孔板表面。
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